Asesoria
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Sistema de medición de fluorescencia de clorofila
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Descripción

Suministros de laboratorio Kasalab le ofrece Software Dual-PAM-100 entre su amplia gama de equipos para laboratorio para la venta en Colombia.

Características generales e interfaz gráfica de usuario

El software DualPAM ha sido optimizado para facilitar su uso y permitir una gestión eficiente de las mediciones de doble canal. El software calcula automáticamente los parámetros de relación de fluorescencia clásicos, así como los parámetros de fluorescencia sugeridos más recientemente, que tienen en cuenta la transferencia de energía entre las unidades del fotosistema II.

Además, el software ejecuta un análisis de pulso de saturación del fotosistema I para obtener información sobre el uso de energía en este fotosistema (Klughammer y Schreiber, 1994, Planta 192: 261-268).

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Medición de fluorescencia de doble canal y P700
Las respuestas de fluorescencia y P700 medidas simultáneamente reflejan la interacción de las reacciones luminosas consecutivas de PS II y PS I que están conectadas a través de la cadena de transporte de electrones entre sistemas. El mismo ΔpH transtilacoideo que induce la extinción no fotoquímica de Fm' con respecto a Fm, causa la oxidación de P700.
Después de la activación luminosa de la fijación de CO 
2 y el posterior consumo de ATP en el ciclo de Calvin-Benson, el ΔpH se relaja, como lo indica la nueva reducción paralela de P700 y la relajación del enfriamiento no fotoquímico (aumento de Fm').
dual-pam-100-software-2-kasalab-colombia.jpgDeterminación de Pm y Fm
El análisis de los parámetros de PS I se basa en una rutina especial para la evaluación del cambio máximo de P700 (determinación de Pm), que implica una iluminación previa con luz roja lejana (o azul en el caso de las cianobacterias) y un pulso de saturación que induce la oxidación máxima de P700 seguida de una reducción completa. La determinación de Pm es análoga a la determinación de Fo, Fm.
Nota: La calidad de la señal del P700 es igual a la de la fluorescencia incluso con una resolución temporal alta y la desviación de la señal es insignificante. Por lo tanto, al utilizar el Dual-PAM-100, la señal del P700 es totalmente equivalente a la señal de fluorescencia.
dual-pam-100-software-3-kasalab-colombia.jpgArchivos de configuración y de activación
El Dual-PAM-100 combina una gran flexibilidad de parámetros de medición preprogramados con un software fácil de usar. Por ejemplo, se proporciona una ventana de activación SP especial para programar el pulso de saturación para el análisis simultáneo de fluorescencia y P700. Los eventos de activación se pueden programar con una resolución de 2,5 µs.
Nota: Para diferentes aplicaciones, se puede guardar una cantidad ilimitada de archivos de activación y archivos de configuración de usuario. De esta manera, todas las configuraciones del instrumento se pueden reproducir de manera confiable en cualquier momento en experimentos futuros.
dual-pam-100-software-4-kasalab-colombia.jpgAnálisis del pulso de saturación
Basándose en el concepto original de partición de energía de excitación de Kramer et al. 2004 (Photosynth Res 79: 209-218), se definen tres rendimientos cuánticos complementarios para PS I en analogía con PS II:
   Y(I) = 1 - Y(ND) - Y(NA)
   Y(I), rendimiento cuántico fotoquímico de PS I
   Y(ND), rendimiento cuántico de disipación de energía no fotoquímica en PS I debido a la limitación del lado donante
   Y(NA), rendimiento cuántico de disipación de energía no fotoquímica en PS I debido a la limitación del lado aceptor
   Y(II) = 1- Y(NPQ) - Y(NO)
   Y(II), rendimiento cuántico fotoquímico de PS II
   Y(NPQ), rendimiento cuántico de disipación de energía regulada en PS II
   Y(NO), rendimiento cuántico de disipación de energía no regulada en PS II
dual-pam-100-software-5-kasalab-colombia.jpgGráfica de rendimiento
Los rendimientos cuánticos Y(I) e Y(II) medidos simultáneamente se representan automáticamente entre sí en la ventana de gráficos de rendimiento. El ejemplo representado se basa en el registro cinético lento original de la curva de inducción de luz-oscuridad de la 
figura 1 .
Cualquier desviación de los puntos trazados respecto de la línea 1:1 refleja un desequilibrio aparente de los dos fotosistemas, que experimentan cambios dinámicos durante el proceso de inducción de luz.
dual-pam-100-software-6-kasalab-colombia.jpgInforme
Todos los datos se guardan automáticamente en un amplio archivo de informe, desde donde se pueden almacenar en el disco duro o exportar a un programa de hojas de cálculo (como Excel). Todos los cambios de configuración quedan documentados.
El informe incluye registros de cinética lenta y archivos de cinética rápida para cada pulso de saturación individual, lo que permite un análisis muy exhaustivo de los datos guardados. El usuario puede editar el informe y se pueden añadir comentarios explicativos.
dual-pam-100-software-7-kasalab-colombia.jpgCurva de luz
Las curvas de respuesta a la luz proporcionan información detallada sobre la capacidad de transporte de electrones y las limitaciones de los dos fotosistemas. Se pueden seleccionar varios parámetros de fluorescencia y P700 para visualizarlos en la ventana de curvas de luz. Las diferencias entre los rendimientos cuánticos, Y(I) e Y(II), y entre las tasas aparentes de transporte de electrones, ETR(I) y ETR(II), pueden estar relacionadas con el flujo cíclico de electrones, las diferencias en la distribución de energía y/o la relación PS I/PS II.
El software DualPAM también admite “Curvas de luz” especiales que implican la evaluación automatizada de la cinética rápida en función del estado de la iluminación.
dual-pam-100-software-8-kasalab-colombia.jpgCinética rápida, escala de tiempo lineal
El aumento de la fluorescencia polifásica al inicio de la luz de saturación continua se mide a la frecuencia máxima (400 kHz) de la luz de medición modulada por pulsos en el modo de adquisición rápida de un solo canal. Las distintas fases de aumento (Fo-I1, I1-I2 e I2-Fm) reflejan diferentes pasos de transferencia de electrones en PS II. Los ajustes de activación para encender/apagar la luz de medición y la frecuencia máxima están preprogramados para un rendimiento óptimo (consulte 
la Fig. 3 ).
El Dual-PAM-100 ofrece una rutina especial para preoxidar el pool de PQ mediante una preiluminación de rojo lejano definida para asegurar una evaluación confiable de los parámetros de fluorescencia. Sin la definición del estado redox de PQ, la interpretación del aumento polifásico es problemática. Por otro lado, mediante la comparación de la cinética +/- FR se puede evaluar el estado redox momentáneo de PQ.
dual-pam-100-software-9-kasalab-colombia.jpgCinética rápida, escala de tiempo logarítmica
Se puede aplicar una escala de tiempo logarítmico para evaluar la parte rápida del aumento de la fluorescencia polifásica. El nivel de Fo se muestra como un paso pronunciado. Con la intensidad dada de la luz saturante, el tiempo de semiaumento de Fo-I1 (fase fotoquímica) es de aproximadamente 100 µs. El nivel de I1 se caracteriza por otro paso pronunciado, seguido de las fases "térmicas" I1-I2 e I2-Fm.
La evaluación de las distintas fases proporciona información valiosa sobre la sección transversal óptica de PS II y el estado de los lados donante y aceptor. Los niveles Fo, I1, I2 y Fm son análogos a los niveles O, J, I y P definidos por Strasser y colaboradores. Sin embargo, estos niveles no son necesariamente idénticos debido a las diferencias técnicas entre los dispositivos aplicados (excitación de fluorescencia, intensidad de la luz saturada, etc.).
dual-pam-100-software-10-kasalab-colombia.jpgCinética lenta y carrera disparada
Además de las curvas de inducción estándar (ver 
Fig. 1 ) y las “grabaciones de gráficos” controladas manualmente, el Dual-PAM-100 también admite las llamadas ejecuciones activadas, que implican la activación de varias fuentes de luz en momentos definidos después del inicio de la ejecución. Las ejecuciones activadas pueden derivarse de grabaciones activadas manualmente y pueden ser editadas por el usuario.
La figura 10 muestra una ejecución activada de una medición P700 para la evaluación del tamaño del depósito intersistema que implica destellos de rotación únicos y múltiples en presencia de luz de fondo de color rojo lejano. Además, el software DualPAM también permite programar archivos de script más extensos, que pueden incluir todas las acciones que se pueden realizar manualmente (es decir, también cambiar entre diferentes modos de adquisición de datos, medición de curvas de inducción/luz y cinética rápida, etc.).

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